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　　以下是兔子表皮生長因子(EGF)ELISA試劑盒的實驗室使用說明綜合指南：

　　BS-4200 兔子表皮生長因子(EGF)ELISA試劑盒 天津本生

　　一、實驗原理

　　采用雙抗體夾心法ELISA技術，通過包被抗兔EGF抗體捕獲樣本中的目標蛋白，依次加入HRP標記檢測抗體和TMB底物顯色，顏色深度與EGF濃度呈正相關。

　　二、試劑盒組成

　　組分 96孔配置 48孔配置

　　預包被微孔板 1×96 1×48

　　標準品(凍干粉) 0.5ml×1 0.5ml×1

　　HRP標記抗體 6ml 3ml

　　TMB顯色液 A/B液各6ml A/B液各3ml

　　20×洗滌緩沖液 25ml 15ml

　　終止液 6ml 3ml

　　三、樣本處理要求

　　血清/血漿?：采集后30分鐘內(nèi)2-8℃離心(1000×g,20分鐘)，-20℃保存避免反復凍融

　　組織勻漿?：按1:9比例加入PBS勻漿，5000×g離心5-10分鐘取上清

　　細胞上清?：1000×g離心20分鐘去除沉淀

　　四、標準品配制

　　加入1ml蒸餾水復溶凍干標準品，配成480pg/ml母液

　　倍比稀釋建立標準曲線(建議濃度梯度：480/240/120/60/30/0 pg/ml)

　　五、檢測步驟

　　加樣?：標準品/樣本各加100μl，37℃孵育120分鐘

　　洗滌?：1×洗滌液洗板4-6次，每次浸泡1-2分鐘

　　加酶標抗體?：100μl/孔，37℃孵育60分鐘

　　顯色?：加TMB避光反應10-20分鐘

　　終止?：加終止液后30分鐘內(nèi)450nm測OD值

　　六、注意事項

　　所有試劑使用前需平衡至室溫

　　避免溶血/脂血樣本影響結果

　　顯色液變藍即失效，不可使用

　　不同批次試劑不可混用

　　七、技術參數(shù)

　　檢測范圍：15-480 pg/mL

　　靈敏度：<15 pg/mL

　　板內(nèi)/板間變異系數(shù)：<10%

　　注：以上資料僅供參考，建議實驗時設置復孔并同步制作標準曲線。具體操作細節(jié)可能因品牌差異需參考對應說明書。

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